PRACTICA DE LABORATORIO

Las células eucariotas poseen un núcleo definido con el material genético organizado en cromosomas. Todos los organismos multicelulares están formados por células eucariotas y también muchos organismos unicelulares y coloniales.

Material
- 1 microscopio optimo
- 5 portaobjetos
- 5 cubreobjetos
- 1 agitador
- 1 bisturí con navaja
- 1 vaso de presipitado
- 2 goteros
- 1 servilleta de papel
- 1 trozo de papel de seda
- 1 caja de petri

Sustancias
- Agua destilada
- Reactivos de Gram: cristal violeta, lugol, alcohol-cetona, safranina
- Sudan III
- Yogurt casero
- Agua de charco o de florero
- Cebolla, papa, plátano, manzana, papaya, aguacate, nuez, zanahoria, betabel
- Flores de gladiola roja


Procedimiento
Células bacterianas Las bacterias son células muy pequeñas (1 a 2 micrómetros ) y pueden tener forma esferica ( cocos), de bastón basilos) o de espiral (espirilos).

1. Haz un frotis de una muestra de yogurt.
2. Realiza una tincion con Gram.
3. Colocale un portaobjetos y obsérvalo a inmersión.
4. Identifica la forma de la célula, la pared y el citoplasma.
5. Dibuja los esquemas en los cuadros para resultados.

Bacterias verde-azules (cianobacterias)Las cianobacterias son organismo procariontes fotosinteticos. la clorofila que contiene esta dispersas en el citoplasma. Ademas de la clorofila, las cianofitas poseen pigmentos accesorios (carotenoides y ficobilinas).

1. Coloca sobre un portaobjeto una gota de agua de charco estancado y verde-azul.
2. Coloca un cubreobjetos y observa al microscopio con el objetivo seco fuerte.
3. Dibuja lo observado y señala las estructuras celulares identificadas.

Pared celular y núcleos en células de catafilia de cebollaLa cebolla es un tallo del cual nacen hojas modificadas llamadas catafilias, que no poseen clorofila y almacenan gran cantidad de carbohidratos.

1. Desprende con una pinza la epidermis interna de un trozo de catafilia de cebolla.
2. Coloca una pequeña porción de la película sobre un portaobjetos, añádele una gota de agua y una de lugol y acopla un cubreobjetos.
3. Observa con los objetivos de seco débil y seco fuerte.
4. Dibuja lo observado y señala las estructuras celulares identificadas.

Cloroplastos y pared celular en células de hoja de elodea Las hojas de Elodea se pueden observar al MO sin ninguna preparación previa ya que están formadas por dos capas de células.

1. Coloca una hojita de elodea sobre un portaobjetos 
2. Agregale una gota de agua y colocale el cubreobjetos.
3. Observar a seco débil y fuerte.
4. Dibuja las células t señala las estructuras identificadas.

Aminoplastos en tuberculos de papa.
Los aminoplastos son plastidiosque contienen el almidón presente en el tubérculo de la papa.

1. Corta un trozo de tubérculo de papa y raspa la superficie de corte con una hoja de afeitar o de bisturí.
2. Coloca el raspado en una gota de agua y raspa sobre un cubreobjetos
3. Agrega una gota de lugol.
4. Acopla un portaobjetos y observa con los objetivos seco debil y seco fuerte.
5. Localiza los aminoplastos teñidos de azul.
6. Dibuja las celulas t señala las estructuras identificadas.

Aminoplastos en platano.
Las celulas de platano tanbien poseen aminoplastos que almacenan almidon pero que se diferencias de los aminoplastos de la papa en su morfologia.

1. Raspa una pequeña cantidad de tejido de la superificie del fruto.
2. Dispersala sobre el portaobjetos.
3. Agrega una gota de lugol.
4. Coloca un cubreobjetos y observa con los objetivos seco débil y seco fuerte.
5. Dibuja las células y señala los almidones identificados.
6. Compara la morfología de los amiloplastos de papa y de plátano.
7. Repite el procedimiento anterior con manzana y papaya. Compara la estructura de los amiloplastos.

Cromoplastos de zanahoria y betabel.
En la zanahoria y el betabel, así como en otra partes de distintas especires de plantas, se encuentran cromoplastos que contienen pigmentos amarillos, naranjas o rojos, llamdos carotenos.

1. Corta una delgada capa de tejido de la porcion mas extensa de la zanahoria.
2. Colócala sobre una gota de agua en el portaobjetos.
3. Acopla un cubreobjetos.
4. Observar con los objetivos seco debil y seco fuerte. Los cromosomas estan teñidos naturalmente.
5. Dibuja las células y señala los cromoplastos identificados.
6. Procede del mismo modo con el betabel.

Cromoplastos en flores coloridas.Las flores coloridas de color entre azul y rojo contienen en los cromoplastos unos pigmentos llamados antocianinas.

1. Desprende la epidermis de los mas delgada posible de una flor colorida, puede ser gladiola.
2. Colocala sobre un portaobjetos con una gota de agua destilada y cubrela con el cubreobjetos.
3. Observa con los objetivos seco debil y seco fuerte.
4. Dibuja las celulas y señala los cromoplastos identificados.

Oleoplastos en celulas de aguacate o nuez

Son plastidos que almacenan aceites como reserva de compuestos energeticos.

1. Haz un raspado del aguacate (o macerado de la nuez y coloca una pequeña porcion sobre un cubreobjetos con una  gota de agua.
2. Agrega una gota del colorante de sudan III
3. Observa con los objetivos seco debil y seco fuerte. Los oleoplastos se ven de color naranja.
4. Dibuja las celulas y señala los oleoplastos identificados.

Celulas animales

1. Con un portaobjetos y muy cuidadosamente haz un raspado de la cara interna del labio inferior.
2. Extiende la masilla que quedo en el borde del portaobjetos y mezcla con una gota de agua destilada.
3. Agrega una gota de safranina y coloca el cubreobjetos.
4. Observa con los objetivos seco debil y seco fuerte.
5. Dibuja las celulas y señala las partes identificadas.

"DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE LA HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA"

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

La prueba de hcg-latex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa de la hCG en orina y suero humano. las partículas de latex recubiertas con anticuerpo monocional anti-hCG presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La hCG es una hormona secretada por la placenta de la mujer embarazada que aparece relativamente pronto en sangre y orina después de la implantación del embrión fecundado. Puede ser detectada en orina a partir del tercer día de la perdida del periodo menstrual y su concentración sigue aumentando hasta alcanzar niveles muy altos después de las 10 semanas de gestación.

REACTIVOS:

LATEX:  Suspención de partículas de latex cubiertas con Ac.  monocional anti hCG humana. Azida sódica 0.95 g/L.

CONTROL +: Orina humana con una concentración de hCG> 1600 U/L Azida sodica 0.95 g/L.

CONTROL -: Suero animal Azida sódica 0.95 g/L.

MATERIAL:

-AGITADOR

-PIPETA

-PLACA DE REACCIÓN (OBSCURA)

PROCEDIMIENTO:

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente
   
   
   . la sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 100uL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de lso controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de hCG- latex vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar. Depositar una gota (50 uL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m durante 2 minutos.

RESULTADO:

La muestra presento aglutinación: POSITIVA (+).

PRACTICA:

BIOMOLECULAS

INTRODUCCIÓN:

Entre los compuestos fundamentales de la materia viva de las células encontramos los carbohidratos, lipidos y proteínas; por esta razón los alimentos que consumen todos los heterotofos incluido el ser humano, deben contener necesariamente estas macromoleculas.

Mediante el uso de pruebas quimicas sencillas se pueden identificar en los alimentos la presencia de estas macromoleculas.

OBJETIVO:

El alumno distinguirá en forma practica que alimentos contienes carbohidratos u cuales proteínas y grasas.

MATERIALES:

• 10 tubos de ensaye                                                                                Reactivo de Fehing
• 1 gradilla                                                                                               Ácido clorhidrico al 50%
• 2 vasos de precipitados de 100 ml                                           Lugol (solución alcohólica de yodo
• 1 agitados
• 1 mechero de bunsen                                                                                 Para proteinas 
• 2 pinzas para tubo de ensaye                                                                   Reactivo de Biuret
• 1 gotero                                                                                                   Ácido nítrico concentrado
• 1 pliego de papel estraza                                                           Hidróxido de amonio concentrado

MUESTRA DE ALIMENTOS:

• Harinas (trigo)
• Frutas (manzana)
• Verduras (zanahoria)
• Carnes (hígado de pollo)
• Lácteos (queso)
• Semillas (haba)

los alimentos deben estar hervidos a excepción de las frutas.

PROCEDIMIENTO:

Reacciones para identificar carbohidratos

1.- Prueba de lugol ( se utiliza para identificar almidones)

• coloca una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo
• agrega dos gotas de lugol
• observa el color que toma la muestra al reaccionar con el lugol
• repite la prueba por lo menos en 5 alimentos diferentes
• anota los resultados.

si la muestra contiene almidón, con el lugol adquiera una coloración azul oscuro (prueba positiva) si no tomara el color ámbar del reactivo (prueba negativa)

los residuos contienen almidones y yoduros que de acuerdo con las normas ecológicas ECOL se pueden verter directamente al desagüe.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR PROTEINAS:

1.- Prueba de Biuret ( se utiliza para identificar proteínas y polipeptidos no menores de tres aminoácidos en solución o al estado solido).

• agregar 1 ml de reactivo de Biuret a una pequeña porción de muestra colocada en cada tubo de ensaye 
• observa la coloración que toma la muestra.
• anota los resultados
• repetir la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

si en la muestra hay proteínas se observara que la muestra toma una coloración violeta o morada (prueba positiva; si se queda de color azul , quiere decir que en la muestra no hay proteínas (prueba negativa)

los residuos contienen cobre, por lo que la parte liquida debe colocarse en un contenedor plástico para su tratamiento o almacenamiento temporal, hasta que pueda desecharse correctamente.

2.- REACCIÓN XANTOPROTEICA ( se utiliza para identificar proteínas que contienen aminoácidos aromativos).

a) agregar 1 ml de ácido nítrico concentrado a una pequeña porción de muestra colocada en un tubo de ensaye, calienta con precaución, sujetando el tubo con unas pinzas para tubo de ensaye y metiendo y sacando el tubo hacia donde no haya personas. puedes calentarlo en baño maría. Espera que enfrié.

b) deja resbalar por la paredes del tubo 1 ml de hidróxido de amonio ( no respires los vapores) sin agitar de tal forma que se formen en dos capas.

c) anota los resultados en el cuadro.

d) repite la prueba por lo menos 5 alimentos diferentes.

si en la muestra hay proteínas se formara un anillo de color naranja entre las capas formadas por el ácido y el hidróxido (prueba positiva).

los residuos contienen un ácido y una base por lo que mezcla con mucho cuidado las dos capas para que ambas soluciones (ácido y base ) se neutralicen y puedas desecharlas.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR LIPIDOS:

1.- Reacción con Sudan lll(se basa en que este colorante es soluble en grasas e insolubles en agua)

a) colocar en los tubos pequeñas porciones de muestras, agregar a cada tubo 5 ,ml de agua de grifo.

c) agregar 3 gotas del reactivo Sudan lll 

d) agita enérgicamente y deja reposar por 5 minutos.

e) observa la formación de gotas de grasa coloreadas con Sudan lll de color naranja lo cual indica que el alimento contiene grasas ( prueba positiva)

f) anota los resultado en el cuadro.

g) repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

Manteniendo las condiciones adecuadas de manejo no cabe esperar problemas ecológicos, por lo que  las sustancias pueden desecharse por el desagüe.

1.-PRUEBA CON PAPEL ESTRAZA:

a) colocar pequeñas porciones de cada alimento en pedazos de papel de estraza.

b) dobla el papel sobre el alimento y presiona con los dedos .

c) observa si hay áreas del papel que se vean traslucidas y aparentemente húmedas lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).

d) anota los resultados en el cuadro

e) repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

RESULTADOS:

1.- Para anotar los resultados obtenidos en cada una de las pruebas se escribe +++ cuando el resultados de la prueba sea muy positivo( el color sea bien definido, lo cual indica alta concentración de la biomolecula buscada  ++ cuando el resultado de la prueba sea regularmente positivo. + para poco positivo y - para negativo (cuando no de el color esperado, lo indicara ausencia de la biomolecula.

ALIMENTO	CARBOHIDRATOS	PROTEÍNAS	LIPIDOS
	LUGOL	BIURET                                       XANTOPTOEICA	SUDAN ll                                              ESTRAZA
TRIGO	++	-                                                    "+++"	+                                                               "+"
MANZANA	+++	+++                                                   "+++"	-                                                                    -
HÍGADO	-	-                                                       "+++"	+++                                                              +++
HABAS	+++	+++                                                "+++"	++                                                                  ++
QUESO	-	-                                                      "+++"	+++                                                              +++
ZANAHORIA	-	-                                                       "+++"	-                                                                   -

PRACTICA 4: TP 

OBJETIVO:

Que el alumno conozca la similitud del TP y el TPT que son casi igual pero que ambas detectan cosas diferentes al paciente que se realizan con diferentes fines de determinación.

INTRODUCCIÓN:

El fibrinogeno es la proteina precursora de la fibrina que al entrecruzarse se convierte en el componente principal del coagulo de la fibrina. La trombina rompe el fibrinogeno para formar un fenómeno de fibrina . los monomeros de fibrina se unen para formar los polímeros insolubles de la fibrina. Puede haber una deficiencia de fibrinogeno en condiciones tale como afrinogenemia congenita ,hipofigrinemia y en algunos casos de disfrinogenemia.

MATERIAL:

Baño maría

Tubos de ensayo

Pipetas automatizadas

Centrifuga

Puntillas para pipetas

 

PROCEDIMIENTO:

1. Recosntituya el reactivo TrinCLOT Fibrinogeno (reactivo de trombina) y mantengalo a temperatura ambiente (18 -26°C9 durante la prueba.
2. Añada 0.2 ml(200ul ) de la muestra de plasma diluida a una copita de Fibrinometro.
3. Incube durante 1-3 minutos  a 37°C(no mas de 5 minutos )
4. Después de la incubación, coloque rápidamente 0.1 ml (100ul) del reactivo TrinCLOT Fibrinogeno (reactivo de trombina) en la copita de fibrinometro y simultáneamente active el cronometro.
5. Anote los resultados  del tiempo de coagulación en segundos.

RESULTADOS DE LA PRUEBA:

En esta prueba se llego al resultado de que la muestra se coagulo en un tiempo de:

1:10(un minuto y siete segundos)

PRACTICA 3:  TPT

OBJETIVO:

Que el alumno conozca y lleve a la practica los cocimiento ya adquiridos anteriormente mediante investigaciones,  y que el alumno conozca para que se realiza esta prueba y que significan los resultados de la prueba de laboratorio.

INTRODUCCIÓN:

La prueba de Tiempo de Tromboplastina Parcial es un procedimiento de screening universalmente aceptado que se utiliza para detectar anomalías en el sistema intrinseco de coagulación. Puede utilizarse también en pruebas de factores para detectar deficiencias de os factores ll, V, Vll, lX, X, Xl y Xll, pero es insensible al factor plaquetario.

El reactivo de TriniCLOT aPTT S se mezcla con plasma del paciente para proporcionar una cativacion uniforme optima de lamuestra.

MATERIAL:

Baño maria

Tubos de ensayo

Pipetas automatisadas

Centrifuga

Puntillas para pipetas

 

PROCEDIMIENTO:

1. Calentar previamente a 37°C un volumen suficiente de reactivo TrinCLOT aPTT S y CaCl2 TrinCLOT a PTT S.
   
   
2. etiquetar un tubo de ensayo para cada muestra (paciente y control) a analizar.
3. Pipetear 0.1ml de muestra o control al tubo adecuado; a continuacion, pipetear 0.1 ml de reactivo TrinCLOT aPTT S a cada tubo.
   
   
4. despues de la activación , pipetear inmediatamente a cada tubo 0.1 ml de CaCl TrinCLOT aPTT S previamente calentando,einiciar simultáneamente el cronometraje para la deteccion sde la coagulacion mediante un método de deteccion conveniente.Anotar el tiempo en segundos transcurridos hasta que se detecte la coagulación.

RESULTADO:

En la muestra que se estudio se llego a la conclusion de que la muestra se coagulo en un tiempo de:

1:30 (un minuto y veintiocho segundos).