HIV

NOMBRE Y FINALIDAD DE USO:

Determine "HIV 1/22" es un inmunoanalisis cualitativo in vitro de lectura visual para la detección  de anticuerpos de los virus  VIH-1 y VIH 2 en suero plasma o sangre hematica . Esta practica esta indicada como ayuda de la detección de anticuerpos al VIH 1/ VIH" en muestras de individuos infectados

OBJETIVO:

Que el alumno pueda conocer la reacción en placa ante anticuerpos de VIH 1 y VIH 2 en suero del paciente infectado ademas de conocer las precauciones necesarias al manejar esas muestras qeu son consideradas de alto riesgo.

INTRODUCCIÓN:

El VIH es un virus que afecta a una cierta cantidad de la población mundial, comparte con los retrovirus las características esenciales de esa familia. Elvirión contiene información genética bajo la forma de ácido ribonucléico (ARN), protegido por una envoltura de membrana. 

Ademas se conoce que esta enfermedad baja las defensas inmunologicas del afectado y que esto lo puede llevar a la muerte a una edad temprana o también ya en una edad adulta.

MATERIAL:

-equipo de prueba para la prueba

-pipeta 

-muestra sanguínea

ADVERTENCIAS:

-Utilice guantes

-No pipete con la boca

-No coma , no bebe, cosméticos y no utilice lentes de contacto en el area donde se realiza la prueba.

-Limpie y desinfecte las salpicaduras de la muestra en el área de trabajo.

-deseche correctamente todo el material utilizado para esta prueba.

PROCEDIMIENTO:

1.- Retire el plástico de  protección de los ensayos.

2.- Para muestras de suero o plasma. 

a. Dispense 50 ul de muestra (con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señalada con una flecha).

b. Esperar entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado .

3.- Para muestras de sangre (venopuncion):

a.Dispense 50 ul de muestra ( con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señala con una flecha)

b. Espere un minuto y dispense  una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere un minuto de 15  minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

4.- para muestras de sangre (punción digital)

a. Dispense 50 ul de muestra con tubo capilar con EDTA) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b. Espera hasta la sangre impregne totalmente la superficie absorbente ya a continuación dispense una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado..

RESULTADOS

 POSITIVA 

"RETRACCIÓN DEL COAGULO"

OBJETIVO:Al termino de la practica el alumno sera capaz de realizar a interpretar la prueba de R.C

INTRODUCCIÓN: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el limite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coagulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al numero de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras, etc.

mide la cantidad de fibrina formada y su retraccion; asi como al numero de funcion de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomisina, que produce la retracción del coagulo.

MATERIAL:

-Tubos de ensaye para centrifuga 

-Alambre de 1mm. de grosor

-Baño Maria de 37ºC

-Equipo de venopuncion.

TÉCNICA

1.- Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml. de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.

2.- Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37 ºC en donde se deja 1hr. Después de la formación del coagulo sin tocarlo.

3.- Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coagulo unido al alambre durante 1 a 2 min.

4.- Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

VALORES NORMALES:

ENTRE 48 Y 64 POR CIENTO.

RESULTADOS:

   2ML      2.5X100= 50%  (dentro de los valores normales )

                                                     5

"PRUEBA DE RUMPEL. LEEDE" Y "RETRACCION DE COAGULO"

OBJETIVO:

Que el alumno logre realizar la prueba del torniquete satisfactoriamente con el fin de poder identificar petequias en una zona identificada del brazo del paciente manteniendo una precion en el mismo durante 5 minutos.

INTRODUCCION:

Las petequias son pequeñas manchas de una coloracion rojiza formadas por extravasación de un número pequeño formadas por extravasación de un número pequeño de eritrocitos cuando se daña un capilar. Estas mismas son pequeños derrames vasculares cutáneos del tamaño de una cabeza de alfiler.

MATERIAL

-Torniquete o manguito inflable del tenciometro.

- Marcador

-Cronometro

PROCEDIMIENTO

Consiste en mantener elevada la presion en un miembro por un periodo de 5 minutos, con un lazo o el manguito inflable del tensiometro como para medir la T.A y comprimirlo con una presión menor que la sistolica pero mayor que la diastolica para producir estasis sanguinea en las venulas capilares.

material a estudiar: observcion de la piel luego de interrumpir la circulatorio venosa. Se realiza el recuento de las petequias (pequeñas manchas hemorragicas en un circulo de 5 cm de diámetro) normalmente no se debe producir mas de 5 petequias por debajo de la coprencion , especialmente en la cara palmar del antebrazo próxima al manguito neumático. Mas de diez petequias , y sobre todo extendidas mas allá del cuarto superior del antebrazo  es patológico.

Preparación previa:

no es necesaria. No repeteir en el mismo miembro antes de los 7 días.

RESULTADOS:

Valores normales: ninguna petequia o hasta diez petequias en un área de 5 cm, Escala para informar en numero de petequias:

0 A 10= 1 +

10 A 20= 2 +

20 A 50= 3 +

50 o mas petequias = 4 +

valores aumentados: pueden indicar coagulación intravascular difusa, disminución del fibrinogeno, disminución de la protrombina, deficiencia del factor Vll, trombiocitopenia, tromboastenia  enfermedad de von Willebrand, deficiencia de vitamina K . Y puede estar asociado a afecciones no relacionadas con los trastornarnos de la coagulación como: escarlatina , hipertension , diabetes, gripe, sarampion, escorbuto.

Tambien es anormal la prueba en las trombopatias quiza debido a que por falla plaquetaria no hay vasoconstriccion adecuada ni formacion de trombo blanco.

Confiabilidad de los resultados: Buena

Medicamentos que pueden alterar los resultados: Corticoesteroides.

RESULTADOS:

2 PETEQUIAS EN UN CIRCULO CON UN  RADIO DE 5 CM (+)

"TIEMPO DE SANGRADO"

OBJETIVO

Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquier de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.

La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de tromboplastina, por lo tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor  Vll. El tiempo de sangrado aumenta en forma caracteristica en la purpura  trombocitopenica.

METODOLOGÍA

Se utiliza el "Método De Duke"

MATERIAL

Lanceta estéril 

Torundas alcoholadas 

Reloj cronometro

Papel filtro

TÉCNICA

1.- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3mm. de profundidad. Se pone en marca el cronometro.

El borde debe ser profundo, y no debe de abarcar venas visibles.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente, sobre la gota de sangre el borde de un pequeño papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme coagule la gota de sangre sobre la herida ,pues los tiempos de sangrado resultaran anormalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tener un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos = numero de gotas divididas entre dos ) se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE

De uno a tres minutos (si embargo, puedo ser a veces hasta cinco minutos en sujetos normales).

MÉTODO DE IVY

TÉCNICA 

1. Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfindonometro con el cual se ejerce precio de 40 mm. De Hg. Que debe permanecer aquel durante toda la prueba.

2. Utilizando una lanceta estéril se hace a intervalos de cortos tres punciones (entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad), a lo  largo de la cara flexora (interna) el antebrazo, evitando las venas visibles. Se pone en marcha el cronometro.

3.- A intervalos  de medio minuto , utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método  de DUKE, el punto final es el mismo.

 TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY.

ENTRE 2 Y 6 minutos (máximo de 7 minutos).

NOTA: el tiempo de sangrado representa sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas  en la hemostasia. Es preferible el método de IVY al de DUKE,pues las condiciones son mas contantes y se realizan en realidad 3 pruebas.

RESULTADOS:

EN EL MÉTODO DE DUKE SE OBTUVO UN TIEMPO DE SANGRADO DE:

2:10 MINUTOS .

EN EL MÉTODO DE IVY SE OBTUVO UN TIEMPO DE SANGRADO DE:

3:30 MINUTOS.

"ROSA DE BENGALA "

Prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucella (Brucella mellitenis , abortus y suis).

PRINCIPIO:

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnostico temprano.

REACTIVOS:

Antígeno Rosa de Bengala

Control Positivo de Brucella 

Control Negativo de Brucella

PRECAUCIONES: Únicamente para uso de diagnostico In-vitro.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS:

El reactivo y los controles son estables de 275-281 K (2°-8°) hasta sus respectivas fechas de caducidad.

MATERIAL PROPORCIONADO:

Placa de prueba ( se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados).

Pipetas  desechables

El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul.

Se sugiere utilizar pipetas automáticas preferentemente.

MATERIAL REQUERIDO (NO PROVISTO):

Cronometro

RECOLECCIÓN DE MUESTRA Y PREPARACIÓN:

Se recomienda que únicamente se utilice suero.

Evite la hemolisis o lipemia de las muestras ya que esto puede inferir con los resultados conservara la muestra de 275-288 K(2-8°C) si no se va a  realizar el estudio en el momento.

PROCEDIMIENTO:

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo controles y muestras del suero.

2. Utilizando la pipeta automática adiciones 30ul de la muestra del paciente e un circulo de la placa.

3. Mezcle suavemente en Antígeno de Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo después coloque 30ul en la placa de prueba en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador( usar un aplicador diferente para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimiento rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Importante Después de este tiempo la lectura ya no es valida.

RESULTADOS:

La lectura debe llevarse acabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó al mezclar. Este es un tiempo limite optimo en el que se da un tiempo limite optimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se puede omitir, ademas de que se pueden presentar reacciones no especificadas.

*NO AGLUTINACIÓN- Suero  Negativo.

*Cualquier cantidad de Aglutinación-Presencia de anticuerpo específicos. Suero Positivo.

Esta es solo una prueba cualitativa  de screening la cual si resulta positiva  debe ser confirmada  mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis como: Aglutinación lenta estandar o Aglutinación lenta en Presencia de ".- Mercapentano..

NOTA: El aislamiento del agente etiologico mediante hemocultivos es de suma importancia .

SENSIBILIDAD: 25 Ul/mL.

resultado:

MUESTRA 1: No presento AGLUTINACIÓN.

"VDRL-USR"

Itroduccion:

La sifilis es una enfermedad generalizada, producida por treponema pallidum, trasmitida habitualmente por contacto sexual.

El diagnostico descnsa en la serologia: los metodos determinan dos clases de anticuerpos: 1) Tipo "cardiolipina" no treponema e inespecificos  y 2) Los antitreponemas especificos. La facilidad para su determinacion ha hecho que los del tipo cardiolipina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales ya sean examenes individuales o encuestas de poblacion: la variantes tecnica mas comunmente empleada es la llamada VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) que determina la floculacion en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lectina.

Reactivos y material proporcionado

-Antígeno en suspencion estabilizado (VDRL)

-Control positivo

-Control negativo

-Aguja No.21 sin bisel

-Pipetas desechables (unicamente para presentaciones de 100 pruebas).

Estabilidad y almacenamiento del reactivo

El antigeno de VDRL y los sueros controles son estables hasta su fecha de caducidad indicada en la etiquetas cuando se almacena de 2 a a 8°C No congelar.

Material y equipo necesario no proporcionado

-Placa concava (indispensable)

-Agitador mecanico

-Cronometro

-Microscopio

Obtención de la muestra

1.Obtener 3.0 ml de sangre por puncion venosa

2. Centrifugar y separar el suero

Método cualitativo:

1. En un anillo de una placa concava deposite 0.05 mL de suerro problema

2. En anillos diferentes colocar una gota se suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superfice del anillo.

3. Añadir una gota del antigeno en supencion estabilizado previamente suspendido, en cada una de las muestras utilizando la aguja No. 21 sin bisel.

4. Colocar la placa sobre un agitador mecanico a 180 rpm DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporacion de las muestras , por lo tanto, la placa en rotacion puede ser cubierta con una tapa de caja petri humedecida con una gasa

5. Leer inmediatamente al microscopio con Objetivo y Ocular 10 X.

Interpretación:

Control Positivo

Presencia de floculacion mediana o grande

Control Negativo

Ausencia de floculacion

RESULTADOS:

En esta prueba se analizaron muestras que salieron negativas en la prueba VDRL que esto indica que el paciente no a estado en contacto con treponema pallidum.