PRACTICA 4: TP 

OBJETIVO:

Que el alumno conozca la similitud del TP y el TPT que son casi igual pero que ambas detectan cosas diferentes al paciente que se realizan con diferentes fines de determinación.

INTRODUCCIÓN:

El fibrinogeno es la proteina precursora de la fibrina que al entrecruzarse se convierte en el componente principal del coagulo de la fibrina. La trombina rompe el fibrinogeno para formar un fenómeno de fibrina . los monomeros de fibrina se unen para formar los polímeros insolubles de la fibrina. Puede haber una deficiencia de fibrinogeno en condiciones tale como afrinogenemia congenita ,hipofigrinemia y en algunos casos de disfrinogenemia.

MATERIAL:

Baño maría

Tubos de ensayo

Pipetas automatizadas

Centrifuga

Puntillas para pipetas

 

PROCEDIMIENTO:

1. Recosntituya el reactivo TrinCLOT Fibrinogeno (reactivo de trombina) y mantengalo a temperatura ambiente (18 -26°C9 durante la prueba.
2. Añada 0.2 ml(200ul ) de la muestra de plasma diluida a una copita de Fibrinometro.
3. Incube durante 1-3 minutos  a 37°C(no mas de 5 minutos )
4. Después de la incubación, coloque rápidamente 0.1 ml (100ul) del reactivo TrinCLOT Fibrinogeno (reactivo de trombina) en la copita de fibrinometro y simultáneamente active el cronometro.
5. Anote los resultados  del tiempo de coagulación en segundos.

RESULTADOS DE LA PRUEBA:

En esta prueba se llego al resultado de que la muestra se coagulo en un tiempo de:

1:10(un minuto y siete segundos)

PRACTICA 3:  TPT

OBJETIVO:

Que el alumno conozca y lleve a la practica los cocimiento ya adquiridos anteriormente mediante investigaciones,  y que el alumno conozca para que se realiza esta prueba y que significan los resultados de la prueba de laboratorio.

INTRODUCCIÓN:

La prueba de Tiempo de Tromboplastina Parcial es un procedimiento de screening universalmente aceptado que se utiliza para detectar anomalías en el sistema intrinseco de coagulación. Puede utilizarse también en pruebas de factores para detectar deficiencias de os factores ll, V, Vll, lX, X, Xl y Xll, pero es insensible al factor plaquetario.

El reactivo de TriniCLOT aPTT S se mezcla con plasma del paciente para proporcionar una cativacion uniforme optima de lamuestra.

MATERIAL:

Baño maria

Tubos de ensayo

Pipetas automatisadas

Centrifuga

Puntillas para pipetas

 

PROCEDIMIENTO:

1. Calentar previamente a 37°C un volumen suficiente de reactivo TrinCLOT aPTT S y CaCl2 TrinCLOT a PTT S.
   
   
2. etiquetar un tubo de ensayo para cada muestra (paciente y control) a analizar.
3. Pipetear 0.1ml de muestra o control al tubo adecuado; a continuacion, pipetear 0.1 ml de reactivo TrinCLOT aPTT S a cada tubo.
   
   
4. despues de la activación , pipetear inmediatamente a cada tubo 0.1 ml de CaCl TrinCLOT aPTT S previamente calentando,einiciar simultáneamente el cronometraje para la deteccion sde la coagulacion mediante un método de deteccion conveniente.Anotar el tiempo en segundos transcurridos hasta que se detecte la coagulación.

RESULTADO:

En la muestra que se estudio se llego a la conclusion de que la muestra se coagulo en un tiempo de:

1:30 (un minuto y veintiocho segundos).

PRACTICA 2: "PRUEBA LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO Y RH DE LA FORMA DIRECTA"

OBJETIVO: 

Al finalizar la practica el alumno podrá dominar la técnica para la realización de la prueba para determinar el grupo sanguíneo y Rh, empleando la técnica directa (con sangre total) utilizando los antisueros correspondientes para su determinación en el sistema ABO.

INTRODUCCIÓN:

PRINCIPIO

en la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos llamado antígenos que representan los llamados grupos o  factores sanguíneos.

se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia llamada precursora, llamada sustancia H(humana).

Los primeros grupos sanguíneos que se descubrieron fueron los llamados ABO y actualmente se conocen muchos mas.

MATERIAL                                                                                        SUSTANCIAS:

Pipetas pasteur                                                                           Suero Anti-a

6 tubos de ensayo                                                                       Suero Anti-B 

Gradilla                                                                                       Suero Anti-D

                                                                                                   Solución isotonica de NaCL al 0.9%

EQUIPO

Centrifuga

PROCEDIMIENTO:

Método de tubo de ensaye:

1.- previa asepsia, practicar venopunción  y recoger 1ml de sangre

2.- depositar en un tubo de ensaye, 19 gotas de solución salina y una gota de eritrocitos para formar la suspencion de eritrocitos al 5%.

3.- Marcar tres tubos de ensaye con las letras A, B Rh respectivamente depositar en el tubo "A" dos gotas de suero Anti-"A" , en el tubo "B" dos gotas de Anti-b y en el tubo Rh dos gotas de suero Anti-D.

4.-Añadir a cada tubo una gota de suspencion de eritrocitos al 5%( preparada con anterioridad)

5..- Centrifugar a 1000 r.p.m durante dos minutos

6.- Sacar los tubos y observar inmediatamente la presencia de aglutinación 

RESULTADO:

METODOS DE TUBO DE ENSAYE

1. Si existe aglutinación en el tubo "A" la sangre es de tipo "A".
2. Si existe aglutinación en el tubo "B" la sangre es de tipo "B".
3. Si existe aglutinación en el tubo "A" y "B" la sangre es de tipo "AB".
4. Si no existe aglutinación en los tubos "A" y "B" la sangre es de tipo "O".
5. Si existe aglutinación en el tubo Rh la sangre sera de factor Rh positivo.
6. Si no existe aglutinación en el tubo Rh la sangre sera de factor Rh negativo.

RESULTADO DE LA PRUEBA:

En esta prueba se llego a la conclusión de que el resultado de la prueba era "B" con Rh positivo, ya que existió aglutinación en el tubo "B" y también en el tubo Rh.

PRACTICA 1:

"PRUEBA DE LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO DE LA FORMA INVERSA"

OBJETIVO:

Al termino de la practica el alumno estará capacitado para comprobar indudablemente la tipificación sanguínea.

INTRODUCCIÓN:

El suero del paciente que contiene anticuerpos se pone en contacto con los eritrocitos que contienen antígenos formando un complejo Ag-Ac, que se manifiesta microscopicamente mediante una aglutinación.

MATERIAL                                                                                                  SUSTANCIAS

Pipetas pasteur                                                                              Eritrocitos lavados A y B conocidos

4 tubos de ensayo                                                                          Suero del paciente

Gradilla

Centrifuga

PROCEDIMIENTO

1.- Se preparan suspensiones de glóbulos rojos al 25 de la siguiente forma, en un tubo de ensaye marcado con la letra A se pone una gota de sangre A y en otro marcado con la letra B se pone una gota de sangre B, se llenan los tubos con solución salina se centrifuga a 3400 r.p.m durante 3 minutos y se decanta el liquido sobrenadante invirtiendo los tubos.

2.- A cada uno de los tubos se añade 1cm de solución salina y se suspenden los globulos rojos.

3.- Se marcan 2 tubos de ensaye, con  la letra A y el segundo con la letra B,añadiendo dos gotas de suero.

4.- Añadir a cada tubo una gota de suspención de eritrocitos al 2% (prepara con anterioridad) previamente mezclada, al tubo A suspención "A" y al tubo  B suspención "B".

5.- Centrifugar a 1000r.p.m durante 2 minutos.

6.- Sacar los tubos mezclando suavemente e interpretar el resultado.

RESULTADO:

Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos A significa que tiene anticuerpos B,  el suero que tiene Ag A corresponde a la sangre B, el suero problema corresponde a una sangre del grupo B.

Si el suero problema aglutina a los glóbulos rojos B significa que tiene anticuerpos B, el suero que tiene Ag B corresponde a la sangre A, el suero problema corresponde a una sangre del grupo A.

Si el suero problema aglutina los glóbulos rojos A y B significa que tiene anticuerpos A y B el suero que tiene anticuerpos Ay B corresponden a la sangre o, en consecuencia el suero problema corresponde a una sangre a una sangre del grupo O.

Si el suero problema no aglutina en los glóbulos rojos A y B significa que no tiene anticuerpos ni A ni B, por lo tanto el suero problema pertenece a una sangre del grupo AB.

 

RESULTADOS DE LA PRUEBA.

En la realización de muestra prueba de laboratorio se llego a la conclusión de que se da el primer caso que ya anteriormente se habían halado tomando en cuenta la aglutinación que se presento en los glóbulos rojos A que esto significa que tiene anticuerpos B y que el suero tiene ag A correspondientes a la sangre B.

"Bio-HBsAG"

PRINCIPIO DE LA PRUEBA

La prueba "Bio-HBsAG"en tira esta diseñada para la detección rápida cualitativa del Antígeno de Superficie  Hepatitis B en Suero Humano.

RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA 

La hepatitis B es una de las mayores causas de hepatitis en la poblacion mundial. Las personas que son portadoras del virus pueden ser fuentes de infección.

Esta prueba esta elaborada a partir de tecnología de inmunoensayo cromatografico de flujo lateral conteniendo una membrana filtrante pre-impreganada con anticuerpos "Anti-HBsAG" y reactivos de oro coloidal activados con anticuerpos "Anti-HBsAG". En la prueba de tira existen dos regiones a lo largo de la membrana , la zona en donde se obtiene el Resultado, denominada región Test "T" y la región de Control "C" , donde se verifica que el desarrollo de la prueba haya sido satisfactorio.

En la región test "T" aparecerá una linea de color rojiza como resultado de la presencia de  Bio-HBsAg en la muestra evaluada . En caso contrario no aparecerá ninguna linea en dicha región . En la región de Control "C" siempre aparecerá una linea de color rojiza independientemente de una resultados positivo o negativo, como indicador interno de control de calidad de la prueba para verificar que esta se realizo adecuadamente.

MATERIAL

-Equipo de "Bio-HBsAG"

-Pipetas desechables

PRECAUCIONES 

1. Este equipo es para uso de diagnostico in-vitro.

2. Este equipo es exclusivamente para uso profesional 

3. No pipete el material con la boca. No fume coma o beba en áreas donde se encuentre el producto.

4. las personas que llevan acabo la prueba deberán utilizar bata y guantes desechables al momento de tomar la muestra y llevar acabo la prueba lavando muy bien sus mano después de realizada la prueba 

5. Utilice una punta de pipeta desechable para cada prueba 

6. Todos lo derramen de líquidos deberan ser limpiados con hipoclorito de sodio o equivalente 

7. Maneja la muestra y el material baja procedimiento rutinarios de tratamiento de agentes infecciosos.

8. Evite contacto directo de manos con ojos y nariz durante la recolección de muestra y desarrollo de la prueba.

DESARROLLO DE LA PRUEBA

1. Saque la tire del sobre y coloquela en una área de trabajo adecuada

2. Codifique la tire utilizada para que coincida con los datos de la muestra del paciente 

3. Coloque suficiente suero en el micro contenedor, recomendando la utilización de un recipiente plástico desechable de 10 mm

4. Tome la tira e introduzca el extremo que tendra contacto con el suero, teniendo precaución de que no se sumerja mas aya de la linea delimitada por las flechas

5. Resultados altamente positivos aparecerá apartir del segundo o tercer minuto. Muestras positivas conteniendo una menos concentración de postividad podrán tardar hasta 15 minutos en aparecer. No interprete resultados después de transcurrido 30 minutos.

Limpie profundamente el área de trabajo después de haber echo las pruebas con hipoclorito de sodio o equivalente.

RESULTADO:

 NO PRESENTO ANTÍGENOS DE SUPERFICIE DE HEPATITIS "B" 

HIV

NOMBRE Y FINALIDAD DE USO:

Determine "HIV 1/22" es un inmunoanalisis cualitativo in vitro de lectura visual para la detección  de anticuerpos de los virus  VIH-1 y VIH 2 en suero plasma o sangre hematica . Esta practica esta indicada como ayuda de la detección de anticuerpos al VIH 1/ VIH" en muestras de individuos infectados

OBJETIVO:

Que el alumno pueda conocer la reacción en placa ante anticuerpos de VIH 1 y VIH 2 en suero del paciente infectado ademas de conocer las precauciones necesarias al manejar esas muestras qeu son consideradas de alto riesgo.

INTRODUCCIÓN:

El VIH es un virus que afecta a una cierta cantidad de la población mundial, comparte con los retrovirus las características esenciales de esa familia. Elvirión contiene información genética bajo la forma de ácido ribonucléico (ARN), protegido por una envoltura de membrana. 

Ademas se conoce que esta enfermedad baja las defensas inmunologicas del afectado y que esto lo puede llevar a la muerte a una edad temprana o también ya en una edad adulta.

MATERIAL:

-equipo de prueba para la prueba

-pipeta 

-muestra sanguínea

ADVERTENCIAS:

-Utilice guantes

-No pipete con la boca

-No coma , no bebe, cosméticos y no utilice lentes de contacto en el area donde se realiza la prueba.

-Limpie y desinfecte las salpicaduras de la muestra en el área de trabajo.

-deseche correctamente todo el material utilizado para esta prueba.

PROCEDIMIENTO:

1.- Retire el plástico de  protección de los ensayos.

2.- Para muestras de suero o plasma. 

a. Dispense 50 ul de muestra (con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señalada con una flecha).

b. Esperar entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado .

3.- Para muestras de sangre (venopuncion):

a.Dispense 50 ul de muestra ( con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señala con una flecha)

b. Espere un minuto y dispense  una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere un minuto de 15  minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

4.- para muestras de sangre (punción digital)

a. Dispense 50 ul de muestra con tubo capilar con EDTA) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b. Espera hasta la sangre impregne totalmente la superficie absorbente ya a continuación dispense una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado..

RESULTADOS

 POSITIVA 

"RETRACCIÓN DEL COAGULO"

OBJETIVO:Al termino de la practica el alumno sera capaz de realizar a interpretar la prueba de R.C

INTRODUCCIÓN: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el limite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coagulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al numero de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras, etc.

mide la cantidad de fibrina formada y su retraccion; asi como al numero de funcion de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomisina, que produce la retracción del coagulo.

MATERIAL:

-Tubos de ensaye para centrifuga 

-Alambre de 1mm. de grosor

-Baño Maria de 37ºC

-Equipo de venopuncion.

TÉCNICA

1.- Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml. de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.

2.- Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37 ºC en donde se deja 1hr. Después de la formación del coagulo sin tocarlo.

3.- Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coagulo unido al alambre durante 1 a 2 min.

4.- Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

VALORES NORMALES:

ENTRE 48 Y 64 POR CIENTO.

RESULTADOS:

   2ML      2.5X100= 50%  (dentro de los valores normales )

                                                     5

"PRUEBA DE RUMPEL. LEEDE" Y "RETRACCION DE COAGULO"

OBJETIVO:

Que el alumno logre realizar la prueba del torniquete satisfactoriamente con el fin de poder identificar petequias en una zona identificada del brazo del paciente manteniendo una precion en el mismo durante 5 minutos.

INTRODUCCION:

Las petequias son pequeñas manchas de una coloracion rojiza formadas por extravasación de un número pequeño formadas por extravasación de un número pequeño de eritrocitos cuando se daña un capilar. Estas mismas son pequeños derrames vasculares cutáneos del tamaño de una cabeza de alfiler.

MATERIAL

-Torniquete o manguito inflable del tenciometro.

- Marcador

-Cronometro

PROCEDIMIENTO

Consiste en mantener elevada la presion en un miembro por un periodo de 5 minutos, con un lazo o el manguito inflable del tensiometro como para medir la T.A y comprimirlo con una presión menor que la sistolica pero mayor que la diastolica para producir estasis sanguinea en las venulas capilares.

material a estudiar: observcion de la piel luego de interrumpir la circulatorio venosa. Se realiza el recuento de las petequias (pequeñas manchas hemorragicas en un circulo de 5 cm de diámetro) normalmente no se debe producir mas de 5 petequias por debajo de la coprencion , especialmente en la cara palmar del antebrazo próxima al manguito neumático. Mas de diez petequias , y sobre todo extendidas mas allá del cuarto superior del antebrazo  es patológico.

Preparación previa:

no es necesaria. No repeteir en el mismo miembro antes de los 7 días.

RESULTADOS:

Valores normales: ninguna petequia o hasta diez petequias en un área de 5 cm, Escala para informar en numero de petequias:

0 A 10= 1 +

10 A 20= 2 +

20 A 50= 3 +

50 o mas petequias = 4 +

valores aumentados: pueden indicar coagulación intravascular difusa, disminución del fibrinogeno, disminución de la protrombina, deficiencia del factor Vll, trombiocitopenia, tromboastenia  enfermedad de von Willebrand, deficiencia de vitamina K . Y puede estar asociado a afecciones no relacionadas con los trastornarnos de la coagulación como: escarlatina , hipertension , diabetes, gripe, sarampion, escorbuto.

Tambien es anormal la prueba en las trombopatias quiza debido a que por falla plaquetaria no hay vasoconstriccion adecuada ni formacion de trombo blanco.

Confiabilidad de los resultados: Buena

Medicamentos que pueden alterar los resultados: Corticoesteroides.

RESULTADOS:

2 PETEQUIAS EN UN CIRCULO CON UN  RADIO DE 5 CM (+)